BD PAXgene Blood RNA Tubes (IVD)

產(chǎn)品詳細(xì)信息

PAXgene血液RNA系統(tǒng)由PAXgene血液RNA管(可從BD，貓。不。762165)用于血液采集、穩(wěn)定和運(yùn)輸，PAXgene血液RNA試劑盒用于硅膠膜RNA分離和自旋柱格式的純化。凈化可以手工進(jìn)行，使用微量離心機(jī)，或在QIAcube自動(dòng)進(jìn)行。ce - ivd標(biāo)記管和試劑盒提供精確的性能規(guī)格，確保高度可靠的RNA純化。

性能

PAXgene血液RNA管的目的是收集的全血和穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)RNA長達(dá)3天的年齡在18歲至25歲之間°C(見圖“RNA穩(wěn)定°C:年齡在18歲至25歲之間的安全系數(shù)"和“RNA穩(wěn)定°C:年齡在18歲至25歲之間IL1B")或5天2 - 8°C(見圖“RNA穩(wěn)定在2 - 8°C:安全系數(shù)"和“RNA穩(wěn)定在2 - 8°C: IL1B")。目前可用的數(shù)據(jù)顯示，細(xì)胞RNA在-20°C或-70°C下至少可以穩(wěn)定96個(gè)月。

使用PAXgene Blood RNA System純化的總RNA純度高，A260/A280值在1.8 - 2.2之間，≤1.0% (w/w)基因組DNA。當(dāng)使用高達(dá)30%的洗脫液時(shí)，至少95%的樣品在RT-PCR中沒有顯示抑制作用。

平均樣品制備時(shí)間(基于12個(gè)樣品制備的數(shù)據(jù))約為90分鐘，只有40分鐘的動(dòng)手時(shí)間。在處理過的樣本中，≥95%的2.5 ml健康人全血的RNA產(chǎn)量≥3µg。由于產(chǎn)量高度依賴于捐助者，個(gè)別產(chǎn)量可能有所不同。個(gè)人捐贈(zèng)者,PAXgene血液RNA系統(tǒng)提供高度可再生的和可重復(fù)的收益率(見圖“可再生的和可重復(fù)的RNA凈化"和“重復(fù)性和再現(xiàn)性的RNA收益率")和可重復(fù)的和可重復(fù)的rt - pcr(見圖“用戶之間的重現(xiàn)性"和“再現(xiàn)性工具包之間很多",和表格)，使其在臨床診斷測試中非常可靠。

經(jīng)處理的樣本中，≥95%的2.5 ml健康人全血的RNA產(chǎn)量≥3 μg。圖“RNA產(chǎn)率和純度-自動(dòng)化處理"表示的是由3個(gè)操作員使用3個(gè)試劑盒批次的自動(dòng)化方案制備的共288個(gè)樣品的RNA產(chǎn)率。由于這些研究使用的是匯集的血液樣本，而不是單獨(dú)的PAXgene血液RNA管，因此結(jié)果不能反映單個(gè)血樣的RNA產(chǎn)量。由于產(chǎn)量高度依賴于捐助者，個(gè)別產(chǎn)量可能有所不同。

當(dāng)使用高達(dá)30%的洗脫液時(shí)，至少95%的樣品在RT-PCR中沒有顯示抑制作用。使用自動(dòng)化程序，通過定量、實(shí)時(shí)RT-PCR檢測rna陰性樣本(水)和rna陽性樣本(人類全血)的β -球蛋白和FOS轉(zhuǎn)錄本序列，無法檢測樣品之間的交叉污染。

用PAXgene血RNA系統(tǒng)純化的RNA和自動(dòng)化的協(xié)議是高純度的，因?yàn)槿狈T-PCR抑制(見上文)和A260/A280值在1.8和2.2之間。通過對β -肌動(dòng)蛋白基因序列的實(shí)時(shí)定量PCR檢測，在≥95%的樣本中，基因組DNA含量≤1% (w/w)。圖“RNA產(chǎn)量和純度-自動(dòng)化處理"顯示了使用3個(gè)試劑盒批次的自動(dòng)化方法制備的共288個(gè)樣品的A260/A280值和相對基因組DNA。

使用PAXgene血RNA系統(tǒng)的RNA純化自動(dòng)化方案提供了高重復(fù)性和可重復(fù)性的RT-PCR結(jié)果，如圖“自動(dòng)和手動(dòng)方案之間的重現(xiàn)性"所示，這使得它在臨床診斷測試中非常可靠。

過程

PAXgene Blood RNA程序簡單，可以使用手動(dòng)或自動(dòng)程序進(jìn)行(見流程圖“手動(dòng)PAXgene Blood RNA程序"和“自動(dòng)PAXgene Blood RNA程序")。

手動(dòng)PAXgene血液RNA程序

將重懸的顆粒與蛋白酶K一起孵育在優(yōu)化的緩沖液中，以實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)消化。通過PAXgene Shredder旋轉(zhuǎn)柱進(jìn)行額外的離心，使細(xì)胞裂解液均質(zhì)并清除殘留的細(xì)胞碎片，并將流過部分的上清液轉(zhuǎn)移到新鮮的微型離心管中。加入乙醇調(diào)節(jié)結(jié)合條件，將裂解液應(yīng)用于PAXgene RNA自旋柱。在一個(gè)簡短的離心過程中，當(dāng)污染物通過時(shí)，RNA被選擇性地結(jié)合到PAXgene硅膜上。在幾個(gè)有效的清洗步驟中去除剩余的污染物。在第一和第二沖洗步驟之間，用DNase I處理膜以去除微量的結(jié)合DNA。洗滌步驟結(jié)束后，RNA在洗脫緩沖液中洗脫并熱變性。

全自動(dòng)PAXgene血液RNA程序

QIAcube全自動(dòng)樣品制備，遵循與手動(dòng)程序相同的步驟，使您可以繼續(xù)使用PAXgene血液RNA試劑盒純化高質(zhì)量的RNA。

自動(dòng)RNA純化協(xié)議包括兩部分(或協(xié)議)，“PAXgene Blood RNA Part A"和“PAXgene Blood RNA Part B"，在這兩部分之間有一個(gè)簡短的人工干預(yù)。

將離心、洗滌、重懸的核酸顆粒從PAXgene Blood RNA Tube轉(zhuǎn)移到加工管中，加工管放置在QIAcube工作臺上的熱搖器單元中。操作者從菜單中選擇并啟動(dòng)“PAXgene Blood RNA Part A"協(xié)議。QIAcube完成了在洗脫緩沖液中進(jìn)行RNA洗脫的步驟。操作人員將含有純化RNA的微離心管轉(zhuǎn)移到QIAcube的熱激器單元中。操作者從菜單中選擇并啟動(dòng)“PAXgene Blood RNA Part B"協(xié)議，QIAcube進(jìn)行熱變性。

平均樣品制備時(shí)間(基于12個(gè)樣品制備的數(shù)據(jù))是125分鐘，只有大約20分鐘的動(dòng)手時(shí)間。

BD PAXgene Blood RNA Tubes (IVD)應(yīng)用程序

當(dāng)該試劑盒與PAXgene血液RNA管一起使用時(shí)，該系統(tǒng)提供全血的細(xì)胞內(nèi)RNA用于分子診斷檢測的RT-PCR。